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1.造模材料 動物：雌性BALB/c小鼠(H-2基因表型)，使用時(shí)年齡均為8～10周;試劑與抗體：倉鼠抗小鼠CD3單克隆抗體、異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)標(biāo)記的抗小鼠CD45RB單克隆抗體、藻紅蛋白(phycoerythrin, PE)標(biāo)記的抗小鼠 CIM單克隆抗體、FITC標(biāo)記的抗小鼠CD25單克隆抗體和FITC標(biāo)記的抗小鼠CD69單克隆抗體，RPMI1640培養(yǎng)液、胎牛血清、青霉素、鏈霉素、左旋谷氨酰胺和慶大霉素。>>>商務(wù)洽談，點(diǎn)此處，在線咨詢

2.造模方法

(1)C1345RBhigh CD4+幼稚T細(xì)胞的分離：首先使用Dynal磁珠分離健康BALB/c小鼠脾臟內(nèi)的CD4+T細(xì)胞，具體操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。將FITC標(biāo)記的CD45RB單抗和 PE標(biāo)記CD4單抗與CD4+T細(xì)胞一起孵育，30min后，使用PBS洗滌2次，以去除未結(jié)合的抗體。然后使用流式細(xì)胞儀(FACS Vantage)分離、獲得CD45 RBhigh CD4+幼稚T細(xì)胞，經(jīng)分析其純度≥98%。

(2)細(xì)胞體內(nèi)移植：調(diào)整CD45RBhigh CD4+幼稚T細(xì)胞濃度，按5×100000個(gè)/只(200μl PBS液)，經(jīng)腹腔或尾靜脈注射到同基因型重度聯(lián)合免疫缺陷病(severe combined immuno- deficiency disease, SCID)小鼠體內(nèi)，繼續(xù)飼養(yǎng)。

3.造模原理 CD45RBhigh CD4+幼稚T細(xì)胞可誘導(dǎo)SCID小鼠發(fā)生慢性結(jié)腸炎。

4.造模后的一般變化 模型組小鼠3～5(4.1±0.3)周出現(xiàn)體重下降，大便變軟;6～8(7.4±0.6)周出現(xiàn)明顯的慢性結(jié)腸炎癥狀，表現(xiàn)為體重明顯下降、腹瀉、黏液膿血便、脫肛、毛發(fā)直立并失去光澤等。

5.造模后病理及生化變化 模型組小鼠結(jié)腸炎癥性增粗，腸壁增厚。主要以升結(jié)腸和橫結(jié)腸為主。顯微鏡下表現(xiàn)為整個(gè)結(jié)腸管壁浸潤有大量的T淋巴細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞，還有少量的中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞，尤其在黏膜層和黏膜下層最明顯，并有炎性肉芽腫形成。腸上皮有潰瘍形成，上皮細(xì)胞表面的黏液丟失，杯狀細(xì)胞消失，腺窩膿腫。腺體增生、延長、絨毛表面結(jié)構(gòu)變形和分叉樣改變。另外，個(gè)別動物的盲腸、回腸末端和胃也出現(xiàn)明顯的炎癥改變。脾臟和肝臟均不同程度增大，鏡下可見在肝臟的匯管區(qū)有明顯的淋巴細(xì)胞浸潤、部分肝細(xì)胞炎癥性壞死，在匯管區(qū)偶爾可發(fā)現(xiàn)少量的分葉核巨細(xì)胞。腸系膜淋巴結(jié)重現(xiàn)，增大。

經(jīng)流式細(xì)胞儀分析，發(fā)現(xiàn)炎癥結(jié)腸黏膜固有層內(nèi)的CD4+T細(xì)胞表面表達(dá)相當(dāng)高的 CD69[(72.5±12.5)%]和CD25[(32.5±8.5)%];腸黏膜組織內(nèi)CD4+T細(xì)胞IFN-γ、IL-2、TNF-α分泌量較對照組增加，而IL-4和IL-5分泌量無變化。

來源：中國實(shí)驗(yàn)動物信息網(wǎng)

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